物品準備：外周血來源的白細胞濃縮液、生理鹽水、50ml注射器×1、20ml注射器×3、10ml注射器×2、50ml離心管×7、15ml離心管×4、淋巴細胞分離液
分離步驟：
1、將外周血來源的白細胞濃縮液用生理鹽水1：1稀釋，從離心管邊緣輕輕加于淋巴細胞分離液上面（淋巴細胞分離液與外周血來源的白細胞濃縮液等體積），離心（2000r/min，20min，22℃），分離白膜層細胞即外周血單個核細胞（PBMC）。
2、用培養液洗滌5-6次（離心速度1500r 15min-1500r 15min-1000r 10min-800r 10min-800r 5min），用含10%的胎牛血清的RPMI 1640液調整細胞濃度為2×106 /ml，加入6孔板，于37℃，5% CO2孵育箱培養2h，吸去懸浮的細胞，用溫熱的RPMI 1640培養液洗滌2遍，所得的貼壁細胞即DC前體細胞。
3、所吸去的懸浮細胞為淋巴細胞，用含10％的胎牛血清的RPMI 1640（含終濃度為800U/L的rhIL-2）重懸，計數并調整細胞密度為1×106/ml，置于75cm2培養瓶內，37℃，5% CO2孵育箱培養，隔天換含新鮮IL-2的RPMI 1640培養液維持細胞活力，待用。
注意事項：
1、密度梯度離心時，加速度宜慢
2、密度梯度離心時間不宜過長，對細胞損傷較大
3、如分離后的細胞懸液中有較多紅細胞，可使用紅細胞裂解液，37℃裂解5min，注意裂解時間不宜過長，以免一項單核細胞活性
4、稀釋血和分離液的比例可以是1：1或2：1，最好達離心管的1/2-2/3，1/2最好，分層明顯，即50ml的離心管只裝到30ml
5、吸取白膜層時，注意不要吸到分離液，可以先吸去血漿層
6、注意淋巴細胞分離液和細胞培養液使用前都應水浴至室溫
7、離心后離心管中液體分為5層：血漿層、PBMC層、分離液層、粒細胞層、紅細胞層。
8、低速離心有助于去除細胞懸液中的血小板，因此洗滌時離心速度較低